紫外可見分光光度計(jì)是一種很重要的分析儀器,在使用一臺(tái)新的紫外可見分光光度計(jì)儀器前,一般需要先對(duì)儀器的線性度進(jìn)行測(cè)試。但大多數(shù)使用者只是在某一試樣的某一濃度附近,用濃度的倍數(shù)變化來(lái)測(cè)出這一段的線性度。這只能反映儀器在小范圍內(nèi)的使用情況,并不能說(shuō)明儀器的線性度是否符合出廠指標(biāo),也不能反映儀器的線性范圍。因此,在儀器使用前對(duì)其線性度的測(cè)試有著重要的意義。
紫外可見分光光度計(jì)工作原理:比爾在研究了各種無(wú)機(jī)鹽的水溶液對(duì)紅光的吸收情況后指出,光的吸收和光所遇到的吸光物質(zhì)的數(shù)量有關(guān),如果吸光物質(zhì)溶于不吸光的溶劑中,則吸光度和吸光物質(zhì)的濃度成正比。即當(dāng)單色光通過(guò)液層厚度一定的有色溶液時(shí),溶液的吸光度與溶液的濃度成正比,這就是比爾定律。
紫外可見分光光度計(jì)主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測(cè)系統(tǒng)組成。紫外可見分光光度計(jì)的技術(shù)指標(biāo)主要有11個(gè),即波長(zhǎng)準(zhǔn)確度、波長(zhǎng)重復(fù)性、光度準(zhǔn)確度、光度重復(fù)性、雜散光、光譜帶寬、基線平直度、穩(wěn)定性、光度噪聲、線性度、線性動(dòng)態(tài)范圍。除了線性動(dòng)態(tài)范圍,其他的技術(shù)指標(biāo)一般都在儀器指標(biāo)中寫出明確的測(cè)量方法及要求。紫外可見分光光度計(jì)的線性度在定量分析工作中有著極其重要的意義,如果儀器的線性度很差,就不可能得到好的定量分析結(jié)果。
分光光度計(jì)線性度測(cè)試的方法很多,常用的方法大致有:
1、溶液稀釋法:將重鉻酸鉀稀釋到不同濃度,測(cè)量不同波長(zhǎng)處的吸光度(一般需測(cè)85個(gè)吸光度值),然后根據(jù)此數(shù)據(jù)作曲線,判斷線性度。
2、中性濾波片法:一般以3塊中性濾波片疊加,比較測(cè)定值與計(jì)算值之差來(lái)判斷線性度。
3、百分法:使被測(cè)試樣濃度成倍增加,測(cè)其吸光度并作曲線,判斷實(shí)驗(yàn)值偏離比爾定律直線部分的程度。
4、改變池厚法:用不同厚度的樣品池來(lái)測(cè)量重鉻酸鉀的吸光度,以此觀察光度計(jì)的線性度。
5、旋轉(zhuǎn)扇形板法:將不同透射率的扇形板置于樣品光束中旋轉(zhuǎn),測(cè)出各點(diǎn)透射率并與真值進(jìn)行
比較。
6、光疊加法:利用雙孔規(guī)來(lái)分段測(cè)量,然后用曲線判斷線性度。
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